Prinzip der Trennung in HPLC
Abb. 1 Mechanismus der Trennung in der HPLC-Säule
In der Säule gibt es 3 Dinge: Verbindungen, mobile Phase und stationäre Phase. Die Definitionen lauten folgendermaßen:
- Verbindungen: Die gelösten Stoffe in der Probenlösung, sollen untersucht werden
- Mobile Phase: Flüssigkeit, die von den Lösungsmitteldosierpumpen transportiert wird
- Stationäre Phase: Funktionelle Gruppen, die chemisch modifiziert ist, aus kugelförmigen Partikeln besteht und in der Säule gepackt sind
Abb. 1 zeigt schematisch die Beziehung zwischen den Probenverbindungen sowie den stationären und mobilen Phasen.
Verbindungen, die stärker mit der mobilen Phase interagieren, eluieren schneller aus der Säule.
Im Gegensatz dazu verbleiben Verbindungen, die stärker mit der stationären Phase interagieren, länger in der Säule.
„Interaktion“ bezieht sich auf die chemische Anziehung zwischen Molekülen. Die Auswahl des die Zielverbindung geeigneten Interaktionstyps ist notwendig für die Optimierung der Trennmethode. Die Art der Interaktion steht im Zusammenhang mit dem Trennmodus. Tabelle 1 zeigt die Liste der allgemeinen HPLC-Trennmodi und ihr grundlegendes Prinzip.
Tabelle 1 Liste der allgemeinen HPLC-Trennmodi und ihres grundlegenden Prinzips
| Trennmodus | Interaktion | Komponenten |
|---|---|---|
| Reversed-Phase-Chromatographie (RP) | Hydrophobizität (niedrige Polarität) | Kleinmolekulare Arzneimittel, Vitamine usw. |
| Normalphasen-Chromatographie (NP) | Hydrophilität (hohe Polarität) | Saccharide, Nukleinsäuren usw. |
| Ionenaustauschchromatographie (IEX) | Elektrostatische Wechselwirkungen | Anorganische Ionen, Aminosäuren, Proteine usw. |
| Größenausschlusschromatographie (SEC) | Molekulare Größe | Synthetische Polymere, Biopolymere, Polysaccharide usw. |
