Bestätigung der Peakintegration
Wo beginnen Sie mit der Überprüfung, wenn die Reproduzierbarkeit von Peakflächen oder Quantifizierungswerten schlecht ist? Sollten Sie zuerst von einer Fehlfunktion der Pumpe oder der Autoinjektorein-Spritze ausgehen und die Geräte überprüfen?
Nein, warten Sie einen Moment. Überprüfen Sie zuerst, ob die Chromatogrammpeaks richtig integriert werden und die Basislinienkorrektur angemessen ist. Eine kleine Änderung der Parameter zur Peakintegration kann einen großen Unterschied machen. Tatsächlich kann es möglich sein, dass schon durch eine kurze Überprüfung der Daten keine neue Erfassung der Daten mehr nötig ist.
1. Eliminierung von Rauschen und anderen unerwünschten Peaks
Breiteneinstellung und Peakdetektion
In einigen Fällen werden Peaks nicht korrekt integriert, weil Zielpeaks ein Rauschen enthalten. Überprüfen Sie in solchen Fällen, ob die Parameter zur Peakintegration (oder die Befehle zur Peakintegration) in der Methode (analytische Datei), die zur Datenanalyse verwendet wird, passend sind. In einigen Fällen kann die Art und Weise, wie der Peak detektiert wird, durch Ändern der Breiteneinstellung korrigiert werden, wie rechts gezeigt.
FWHM
Normalerweise können unerwünschtes Rauschen oder andere Peaks eliminiert werden, indem die [WIDTH]-Einstellung (Einheiten: Sekunden) größer als die volle Breite bei halber Höhe (FWHM) der unerwünschten Peaks, oder die [SLOPE]-Einstellung (Einheiten: µV/sec) größer als die ansteigende Steigung der unerwünschten Peaks eingestellt wird.
Steigung der Peaks
(In LabSolutions LC können die Einstellungen [WIDTH] und [SLOPE] über [Methode] - [Datenanalyseparameter] - den Tab [Integration] festgelegt werden.)
Hinweis: Anstatt die Parameter zur Peakintegration für jede Datengruppe zu ändern, sollten diese Parameter bei der Entwicklung der Methode festgelegt werden. Damit Peaks mit denselben Parametern zur Peakintegration für alle unter denselben analytischen Bedingungen gemessenen Daten integriert werden können.
2. Integration von nicht getrennten Peaks
Verwendung von Zeitprogrammen
LabSolutions LC [Integrationszeitprogramm]
Auch wenn eine angemessene Integration mit regulären Parametern zur Peakintegration nicht möglich ist, kann eine geeignete Integration mit einem Zeitprogramm, das die Integration zu bestimmten Zeiten angibt ([Integrationszeitprogramm] in LabSolutions LC) möglich sein.
Die Abbildungen A bis D zeigen, wie die Methode zur Peak-Integration im gleichen Chromatogramm große Auswirkungen auf die Flächenwerte haben kann.
In Abbildung A wird eine Basislinienkorrekturlinie von einem unerwünschten negativen Peak gezeichnet, sodass die berechneten Peakflächen übermäßig groß sind. Wenn die [Negative Peak Ablehnung] im Zeitprogramm festgelegt ist (beginnt nach 0,5 Minuten und endet nach 2 Minuten), werden die Auswirkungen negativer Peaks, wie in Abbildung B gezeigt, eliminiert.
(In LabSolutions LC können negative Peaks abgelehnt werden, indem [Negative Peak Ablehnung] festgelegt wird.)
Abb. A Ohne Ablehnung unerwünschter negativer Peaks
Als nächstes ermöglicht das Ändern der [Drift]-Einstellung (siehe Abbildung unten) entweder eine vertikale Partitionierung (Abb. B) oder eine Basislinienpartitionierung (Abb. C).
Beziehung zwischen den DRIFT-Einstelllinien und der Basislinienkorrekturlinie
- Da Punkt B höher ist als die DRIFT-Einstelllinie von Punkt A und Punkt C niedriger ist, ist die Basislinienkorrekturlinie die Linie A-C.
- Da Punkt D niedriger ist als die DRIFT-Einstelllinie von Punkt C, ist die Basislinienkorrekturlinie die Linie C-D.
Abb. B Vertikale Partitionierung
Abb. C Basislinienpartitionierung
(In LabSolutions LC können die DRIFT-Linien über die [Drift]-Einstellung geändert werden.)
Wenn erzwungene Nachlaufneigung verwendet wird (beginnend nach 2 Minuten und endend nach 6 Minuten), wird die Peakintegration wie in Abbildung D durchgeführt. Bei erzwungener Nachlaufneigung werden Peaks in anderen nicht spezifizierten Intervallen vertikal partitioniert, selbst wenn sie eine nachlaufende Form haben.
(In LabSolutions LC kann erzwungene Nachlaufneigung über die EIN/AUS-Intervallschaltung unter [Nachlauf] festgelegt werden.)
Diese Befehle zur Peakintegration und Parameteränderungen können nicht nur einmal, sondern viele Male mithilfe von Programmen zur Peakintegrationszeit angegeben werden.
(Es wird empfohlen, die richtigen Parameter zur Peakintegration während der Methodenentwicklung zu berücksichtigen.)
Abb. D Erzwungene Nachlaufneigung
Verwendung der manuellen Peakintegration
Idealerweise sollten dieselben Parameter zur Peakintegration verwendet werden, um Daten zu analysieren, die unter ähnlichen analytischen Bedingungen erfasst wurden. In einigen Fällen können die gewünschten Ergebnisse jedoch nicht mit diesen Programmen erzielt werden, oder es ist wünschenswert, den Erkennungspunkt der einzelnen Peaks zu verschieben. In solchen Fällen kann die Basislinienkorrekturlinie manuell geändert werden, indem die Parameter (oder die Befehle zur Peakintegration) für einzelne Datensätze festgelegt werden.
Um sie von den Parametern zur Peakintegration (oder den Befehlen) für Methoden zu unterscheiden, wird dies als manuelle Peakintegration bezeichnet.
Daher kann, wie oben beschrieben, einer der Faktoren, die die Reproduzierbarkeit der Peakfläche bestimmen, beseitigt werden, indem auf die Einstellungen zur Peakintegration geachtet wird.
