Über die Auflösung, Teil 1
1. Einführung
Die Prozesse, die Teil der HPLC-Analyse sind, können in die Kategorien Probenvorbereitung, Injektion, Trennung, Detektion und Datenverarbeitung eingeteilt werden. Faktoren, die Quantifizierungsfehler verursachen können, sind in allen diesen Phasen vorhanden. Aber hier konzentrieren wir uns die Phase der Probenvorbereitung.
Was ist multidimensionale Chromatographie?
Die multidimensionale Chromatographie verwendet eine Kombination mehrerer Chromatographietechniken, Trennmodi und Säulen. Damit können noch mehr Komponenten getrennt werden. Sie erreicht eine deutlich höhere Trennung als die normale, eindimensionale Chromatographie. Verschiedene Trennmodi und die entsprechenden mobilen Phasen können für die HPLC ausgewählt werden. Die verschiedenen verfügbaren Permutationen deuten darauf hin, einen Grad an Selektivität zu erreichen, der mit einer eindimensionalen Trennung allein nicht möglich ist.
Die Gleichung (1) zeigt, dass die Auflösung der Unterschied zwischen den Retentionszeiten der Peaks geteilt durch die durchschnittliche Peakbreite ist. In einem Peak mit Gauß-Verteilung beträgt die Peakbreite W = 4 σ (wobei σ die Standardabweichung ist) und die Peak-FWHM ist W0.5h = 2,354σ. Wenn man diese Beziehungen in Gleichung (1) einsetzt, ergibt sich die Gleichung (2).
Auflösung und Peaktrennung
Die Auflösung wird als numerischer Wert dargestellt, wie 0,8, 1,0 oder 3,0. Aber wie steht der Wert, der die Auflösung darstellt, in Beziehung zur tatsächlichen Peaktrennung? Wenn man bei einer Auflösung von 1,0 davon ausgeht, dass die beiden Peaks eine Gaußsche Verteilung haben und die gleiche Peakhöhe und Peakbreite aufweisen, beträgt der Unterschied in der Retentionszeit nach Gleichung (1) 1,0 W oder 1,0 × 4σ = 4 σ. Im Falle einer Gauß-Verteilung umfasst 4 σ 95,4 %, sodass sich die Peaks um 2,3 % überlappen ((100 % - 95,4 %)/2). Dies bedeutet, dass 2,3 % des Peaks in den anderen Peak eindringen, von einer senkrechten Linie, die in das Tal gezogen wird. In ähnlicher Weise zeigt eine Auflösung von 1,5 einen Unterschied in der Retentionszeit von 1,5 × 4σ = 6σ, was einem Überlappen von 0,15 % entspricht ((100 % - 99,7 %)/2). Siehe Abb. 2.
Auflösung und Trennfaktor, Retentionsfaktor, Anzahl der theoretischen Böden
Neben der Auflösung wird auch der Trennfaktor (α) als Indikator für die Trennung zweier Peaks verwendet. Der Trennfaktor wird als Verhältnis der Retentionsfaktoren (k) definiert, wie in Gleichung (3) gezeigt.
Die Auflösung kann in Bezug auf die theoretische Bodenzahl, den Trennfaktor und den Retentionsfaktor ausgedrückt werden, wie in Gleichung (4) gezeigt.
